在肿瘤与自免免疫治疗领域，T细胞衔接器（TCE）是近年来最受关注的“精准免疫调控利器”之一, 它能像 “桥梁”一样，一端结合疾病相关细胞表面抗原，另一端连接T细胞表面的CD3分子，实现活化T细胞对靶细胞的精准杀伤。而CD3抗体，正是这座 “桥梁” 中决定T细胞激活效率、安全性与临床转化潜力的核心部件。

作为核心元件的CD3抗体也是TCE类药物研发路上的痛点：许多CD3抗体仅能识别人源CD3亚基，而不与猴源CD3结合，导致无法在非人灵长类动物（如食蟹猴）模型中开展更加充分的安全性和有效性验证，为未来的临床开发带来许多不确定性风险；部分抗体虽有交叉活性，却存在T细胞过度激活、成药性差，构建成TCE多抗以后轻链错配等问题，也会影响产品的竞争力。

菲鹏制药团队最新筛选获得的高人猴交叉反应活性的CD3纳米抗体——具备良好的功能活性和成药性，并且非常便于进行多抗设计筛选，为TCE或相关产品研发提供了更好的解决方案。

评价 CD3 纳米抗体的临床转化价值，“人猴交叉活性” 是一道关键门槛——具有能同时识别人和食蟹猴的CD3抗体，可以在食蟹猴模型中开展临床前安全性评估，而对于B细胞异常相关的疾病，则可以进一步在猴子体内同步进行药物的有效性验证，这些数据将为后续人体临床试验的研发及商业化决策提供极大的参考价值。菲鹏制药研究人员通过流式细胞术检测了内部研发的这款 CD3 纳米抗体（FAPON VHH）与人外周血单个核细胞（Hu-PBMCs）、食蟹猴外周血单个核细胞（Cyno-PBMCs）、人的T细胞以及Jurkat细胞系的结合能力。结果显示：与经典的人猴种属交叉抗体克隆SP34相似，FAPON VHH和这些细胞均有结合活性，并展示出良好的人猴交叉反应活性。

图1. CD3抗体与不同细胞的结合活性

T细胞激活功能也是衡量一个CD3抗体的重要指标。通过两种不同的体外T细胞激活实验验证了FAPON VHH活化T细胞的功能。结果显示，当FAPON VHH包被到96孔板时，可以达到与SP34相当的活化水平，而当FAPON VHH不包板时则不会对T细胞产生活化作用。此外，用FAPON VHH构建的TCE双抗在仅有T细胞的情况下同样也不会激活T细胞。FAPON VHH 介导 T 细胞活化的过程具有明确依赖性 —— 需借助交联作用或靶向结合方可完成，这一特性对保障 TCE 药物的安全性具有显著积极意义。

图2. CD3抗体对T细胞的激活作用

抗体的反应特异性是发挥药效和保证安全性的关键因素。对于CD3抗体也是同样的问题。通过对Raji细胞的非特异性结合检测和蛋白表面电荷结构模拟分析，结果显示对照的CD3 VHH PC与Raji细胞有显著的非特异性结合，此外其抗体存在局部正电荷富集区域，而FAPON VHH则几乎不与Raji细胞结合，且电荷的分布也更均匀。FAPON VHH 的高反应特异性优势显著，这一特性在未来 TCE 药物的设计与构建过程中，将对提升药物安全性、优化药代动力学表现产生至关重要的正向影响。

图3. CD3抗体的多反应性（Polyreactivity）检测分析

一款优秀的CD3抗体，不仅要“能打”，还要“好用”——也就是能顺利融入TCE 双抗、三抗的构建中，同时具备良好的安全性，有效性以及成药性等。为了覆盖更多B细胞，达到更好的B细胞清除效果，研发人员将FAPON VHH与抗CD19以及抗BCMA的纳米抗体融合，构建了一系列的TCE双抗和三抗分子，并对其有效性和安全性进行了系统性的评估。

其中，由CD3-CD19-BCMA三纳米抗体组成的 F9， 充分发挥出了CD19/BCMA双靶点有更大范围覆盖的优势，在CD19与BCMA不同表达模式的肿瘤细胞模型中均表现出强效的杀伤活性，其效能与已经获批上市的CD19双抗 Blinatumomab和 BCMA双抗Elranatamab以及Teclistamab相当甚至更强。此外，其细胞因子分泌水平与已上市双抗相近，未出现明显的细胞因子风暴风险。上述研究结果证实，基于 FAPON VHH 构建的 TCE 三抗在体外活性实验中兼具优异的杀伤活性与良好的安全性。

图4. TCE分子的杀伤和细胞因子分泌

为进一步验证体内药效，研究人员在人外周血单个核细胞（PBMC）重建的免疫缺陷小鼠中开展对比实验。在Naml-6 和 NCI-H929不同表达模式的原位荷瘤肿瘤模型上，F9均能够在较低的浓度下展现出非常显著的抑瘤效果。上述结果证实，基于 FAPON VHH 构建的 TCE 三抗在两种小鼠荷瘤模型中均有良好的体内有效性。

图5. TCE分子的体内药效

相较于常规抗体，纳米抗体在设计成多抗时具有显著优势 —— 可彻底规避轻重链错配问题，为多样化结构设计提供充足空间。在研发实践中，菲鹏制药在不同项目里积极探索，通过整合共刺激元件、各类 TAA 抗体等，开展了丰富的结构设计工作，涉及的结构类型多达 百余种。对这些分子的成药性初步评估结果显示，绝大部分分子不仅表达水平理想，且纯度表现优异。这充分证明，FAPON VHH 在与不同元件组合进行多元结构设计时，既能保障结构设计的灵活性，又能满足良好的成药性标准。以下仅列出部分结构作为示例。

图6. 不同结构TCE分子在早研瞬转水平下的的成药性数据示例

高性能 CD3 纳米抗体具有较大的市场需求，随着技术研发的深入推进，近年来不断有新的 CD3 纳米抗体开发成果被公开报道。本研究选取专利已披露的 4 款 CD3 纳米抗体作为对照，与 FAPON这款 CD3 纳米抗体进行人猴交叉结合活性横向比较。实验结果显示：在与人 PBMC 及猴 PBMC 的结合反应中，FAPON VHH 的结合活性显著高于另外 4 款 CD3 纳米抗体，特别是在猴交叉反应活性上，表现出远超其他分子的优势。此外，当所有 CD3 纳米抗体均与相同的抗 TAA 抗体组合形成结构相同的 TCE 双抗后，FAPON VHH 构建的 TCE 双抗在杀伤活性上依旧显著优于由其他 CD3 分子构建的 TCE 双抗。

图7. 不同CD3纳米抗体的活性比较

在药物开发领域，CD3 抗体的应用正朝着多元化方向快速拓展，涵盖体内双特异性 T 细胞衔接器（TCE）、体内嵌合抗原受体 T 细胞（in vivo CAR-T）、T 细胞受体工程化 T 细胞（TCR-T）以及其他各类 T 细胞靶向治疗等研究方向。值得注意的是，不同应用场景对 CD3 抗体的亲和力需求存在显著差异。基于此，本研究以人源化亲本分子为基础，开展了一系列 CD3 抗体亲和力定向改造工作。结果显示：经过亲和力改造后，获得了不同亲和力的CD3抗体，大部分抗体在改造过程中仍保有猴交叉结合活性。这些不同亲和力的CD3纳米抗体序列，为未来探索提供了更多可能性。

图8. CD3纳米抗体的亲和力改造

从 “人猴交叉结合” 的核心优势，到 “激活 T 细胞” 的功能保障，再到 “适配多抗” 所体现的体外活性与成药潜力，加之 “体内抑瘤 + 安全” 的双重验证，这款 CD3 纳米抗体为 TCE 研发提供了 “少走弯路” 的优质选择 —— 它不仅能攻克临床前动物模型验证的痛点，更可凭借优异的成药性与安全性，降低后续研发风险。

菲鹏制药依托自主研发的纳米抗体序列库，成功搭建起具有特色的 T 细胞衔接器（TCE）技术平台。该序列库覆盖 T 细胞激活的第一信号、第二信号及偏向性激活相关靶点，其配套的纳米抗体元件不仅具备良好的人 - 猴交叉反应活性，还可灵活适配多样化的分子结构设计需求。与此同时，菲鹏制药同步推进多条优质创新管线的内部开发，研究领域覆盖肿瘤与自身免疫性疾病两大方向。在加速自有管线临床转化进程的基础上，公司亦积极开展对外授权合作，以开放共享的模式赋能生物医药行业的协同创新与高质量发展。

菲鹏制药是一家专注于生物大分子药物研发的创新型企业，公司聚焦肿瘤及自身免疫性疾病等重大疾病领域，专注于未被满足的临床需求，打造了基于全球领先的哺乳动物细胞展示技术的生物大分子发现平台、IL-10M蛋白改造和融合平台、以及基于人猴种属交叉CD3纳米抗体的TCE产品平台等，并成功开发出多条国际领先的差异化新药管线。菲鹏制药已构建涵盖药物发现、临床前研究、CMC、注册、早期临床开发等环节的新药研发能力，始终秉持高效创新理念，致力于开发创新药物解决方案和提高药物质量，让人们用上更好的药。

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